primavera-verano 2007 La biología molecular y su aplicación en diagnóstico: el diagnóstico molecular Perdonen mi atrevimiento pero seguramente muchos . (CMT), feocromocitoma e hiperplasia de paratiroides Retrieved on January 12, 2023 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Molecular-Biology-Techniques.aspx. Algunas de ellas son aplicables a todo tipo de muestra biológica, mientras que otras son específicamente utilizadas para cada uno de los tipos de material de partida. 1. CfoI Application and interpretation of FISH in biomarker studies. It is an indispensable tool for introducing advanced undergraduates and beginning graduate students to the techniques of recombinant DNA technology—or gene . 1. Conceitos Básicos de Técnicas em Biologia Molecular 5 Autores Liziane Maria de Lima D.Sc. Causas de afectación en la proteína: 8) ¿Cuáles son los pasos de la clonación de un gen? The explanation for each technique includes a brief description of its basics, as well as some advantages, drawbacks and current use of the technique. GENÉTICO ***, Díez-Pérez R.*, Bascones-Martínez A.****. 0000012995 00000 n López-Durán M, Campo-Trapero J, Cano-Sánchez J, Díez-Pérez R, Bascones-Martínez A Aplicación de las técnicas de biología molecular en oncología oral Molecular Biology Techniques: A Classroom Laboratory Manual, Fourth Edition is a must-have collection of methods and procedures on how to create a single, continuous, comprehensive project that teaches students basic molecular techniques. 2009;507:305-23. Corrida electroforética: producto amplificado (sin cortar) + producto amplificado y digerido. Diagnóstico y pronóstico molecular del cáncer. mercaptoetanol? ¿Qué hay que hacer previamente al PDF, Genética Humana (Borges-Osório) – 3. ed. J Am Anim Hosp Assoc 2006;42:326-35. 1- Aislamiento de ADN �7(��J�8ef�ӵo�5l�4��S��B�g�)��/�0! PDF, Atenção Farmacêutica & Farmácia Comunitária, Ciências Farmacêuticas – Guanabara Koogan, Current, Diagnóstico e Tratamento – Lange, Farmácia Clínica & Atenção Farmacêutica – Atheneu, Gestalt-terapia: fundamentos e práticas – Summus, Uma introdução à… – Sociedade Brasileira de Genética, Medicina intensiva / Medicina de emergência / Primeiros socorros, Biologia Molecular: princípios e técnicas (Cox) – 1. ed. Sobre el libro. Los capítulos fueron escritos por especialistas en el, uso de los diferentes marcadores, con varios años de experiencia en el área. El concepto de "diagnóstico molecular" es un término amplio que incluye técnicas de biología molecular en beneficio de la salud humana, detectando y/o cuantificando secuencias genéticas específicas de ácido desoxirribonucleico (ADN), ácido ribonucleico (ARN) o proteínas. Una vez secuenciado el genoma humano, hay que acotar y otorgar su función a cada fragmento de ADN correspondiente a un gen. El Proyecto Genoma Humano ha revelado que los diez billones de pares de bases que forman el ADN codifican entre 30.000 y 40.000 genes (1). Fenotipos asociados con mutaciones en el oncogén RET Glazer CA, Chang SS, Ha PK, Califano JA. Folia Histochem Cytobiol. 0000010748 00000 n u�r/��MP��W"�F�Ӡ��ΊX9�Ꮓ$0�L{A���'0?�R`��l�rGU��7k0��˓�.�+��묓�3�@+}�iZ���0-�w��9ܡ��Pa���:@ŽB:3�N�%���#z��p���T���&��I ڦՎ�bT�ңɲ ?��kd�a��ɽҼ �x�th �4ĈӷbL siguientes tratamientos: Título: Biologia Molecular – princípios e técnicasEdição: 1ª ed.Idioma: PortuguêsAno de publicação: 2012Número de páginas: 943 Tamanho: 345 MBEstado: Original da EditoraPermite copiar textos: Sim, G.Drive Proto-oncogenes • Utilidad: VIH, Encefalopatía espongiforme bovina , enfermedad de Lyme. La limitación de los microarrays de ADNc es que no son capaces de detectar modificaciones que ocurran después de la transcripción (metilación, fosforilación, etc), permitiendo en este caso sólo una visión parcial del proceso (7). - + - + - La técnica no consigue una amplificación de proteínas igualable a la PCR. 3-Separar fragmentos por electroforesis mutación genera o desaparece un sitio de endobj CÁNCER (proto-oncogenes – genes supresores de tumores) 18)Se quiere amplificar una secuencia de 500 pb ubicadas entre estas dos secuencias. La biología es una ciencia que tiene como objeto de estudio conocer la estructura, el desarrollo, la interacción y el funcionamiento de todos los seres vivos. Entre las variaciones de esta técnica se encuentran la PCR en tiempo real (PCR cuantitativa), capaz de determinar el número de copias de ADN presentes en una muestra, o la PCR transcriptasa inversa, adaptada para analizar ARN mensajero monocatenario mediante un paso previo de conversión a ADN complementario bicatenario. La Genómica y la Proteómica utilizan para su estudio en el campo de los biochips, los ADN-chips y los microarrays proteicos, respectivamente. • Esta deleción genera una proteína que no se pliega de manera normal y acaba siendo $120.000.- Para mayor información sobre financiamiento y formas de pago, revisar sección, Postulación a concursos internos de investigación, Postulación al Programa de Movilidad Estudiantil, Certificación en estándares de igualdad de género. Tachibana M, Shinagawa Y, Kawamata H, Omotehara F, Horiuchi H, Ohkura Y, et al. luego de la PCR. We speak to Dr. George Emanuel from Vizgen about their new MERSCOPE Platform and how it is accelerating the field of drug discovery by combining both single-cell and spatial genomics. A toda esta tecnología se le une la bioinformática, capaz de descifrar la ingente cantidad de los datos generados por las técnicas de biología molecular (2). Hum Pathol 2007; 38(2):228-38. Teléfonos y correos | 0000021288 00000 n Ésta se, ha convertido en la principal técnica para separar moléculas de ácidos nucleicos, y proteínas. PDF, Genética Médica, uma abordagem integrada (Schaefer & Thompson) – 1. ed. Departamento de Medicina y Cirugía Bucofacial. Estrutura dos Ácidos Nucleicos; 3. La longitud de los telómeros es un importante indicador en el estudio tanto de la estabilidad cromosómica como de la actividad de la telomerasa y la capacidad proliferativa de las células, pudiendo utilizarse para el pronóstico de malignidad en las células tumorales (13). con la proliferación alterada Arrays – A DNA microarrays or DNA chip is a collection of DNA spots mounted on a solid surface such as a microscope slide that can be used to simultaneously quantify protein expression levels across a large number of genes. �o�%��3�:��c�Y|Կ@̏��۝DԦQ!��s��l�6m,V�u�W��NQnj�k�8hi�%1#��)I���ۆfu���_]��QP՛�����&\�&�t���2|A�2M�LD���_������ stream endstream endobj 48 0 obj<> endobj 50 0 obj<> endobj 51 0 obj<> endobj 52 0 obj<>/Font<>/ProcSet[/PDF/Text]/ExtGState<>>> endobj 53 0 obj<> endobj 54 0 obj<> endobj 55 0 obj<> endobj 56 0 obj<> endobj 57 0 obj<> endobj 58 0 obj<> endobj 59 0 obj<> endobj 60 0 obj<> endobj 61 0 obj<> endobj 62 0 obj<>stream �o5l=�������8�z�Y��i��I+��h��e�|OP�U��C�!�$���Z�%V/���b��(�K��ۯރ��H��B/�K���N k���). 215 Cell 2000;200:57-70. Electroforesis en gel de Processamento de RNA; 12. Con las proteínas, el escenario se vuelve más complicado por varias razones, entre las que se encuentran las siguientes: - La amplia variedad proteica permite muchas formas de funcionalización e hibridación. <> particular en 5´ CCA CTG TGC GAC GAG CTG CGC CGC ACG-3´ Indiv. 0000037408 00000 n 3. 19)¿Cómo se analiza ADN (Southern blot) y ARN (Northern blot) por electroforesis? 0000001036 00000 n Facultad de Odontología. Destacan en particular por su gran utilidad, la tecnología microarray, los biochips y la PCR. 0000003758 00000 n protooncogén que introduce un sitio de corte para CfoI, una 0000001929 00000 n P3 5´ GTCGCGGAGTCCCCGG 3´ Entre los métodos empleados para medir la longitud de los telómeros se encuentran los siguientes: southern blot, hybridization protection assay, fluorescence in situ hybridization (FISH), citrometría de flujo, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la microscopía electrónica. a) SDS + calor; Diagnóstico molecular 262 endobj Departamento de Medicina y Cirugía Bucofacial. 4 0 obj Genes normales que regulan la proliferación y supervivencia celular News-Medical. 0000014028 00000 n Genetic portrait of mild and severe lingual dysplasia. Este curso dará al alumno una visión completa, permitiéndole conocer el proceso de análisis de ADN, ARN y proteínas, profundizando en: Material básico que se utiliza en el laboratorio de Biología Molecular. Casa Central. 262 259 Luego de la corrida <>/ProcSet[/PDF/Text/ImageB/ImageC/ImageI] >>/MediaBox[ 0 0 595.32 841.92] /Contents 4 0 R/Group<>/Tabs/S/StructParents 0>> Molecular biology is an area of biology concerned with the process of gene transcription to yield RNA, the translation of RNA into proteins and the role those proteins play in cellular function. P4 3´CGGGTTGGGCCCGTGTAA 5´ Ha realizado un Diplomado en Formación Pedagógica en Educación Superior y otro Diplomado en Gestión en Educación Superior en la Universidad Santo Tomás. A, continuación, se abordan los microsatélites que en los últimos años se han, convertido en los marcadores co-dominates (que permiten diferenciar a los, homócigos y heterócigos) más empleados. 0000003444 00000 n Tratamiento con enzima de restricción A lo largo del libro se muestran, ejemplos del uso de los marcadores en diferentes áreas de investigación como la. - La determinación de cambios en los niveles celulares de expresión génica o proteica; el análisis de distintos candidatos farmacológicos. �� o�V>�**��V�K-3$�ǧ�,��"j�rD�I���F�1j�Eу tVi�:����c�֩;�)���Vj/��ɠ�`��,1g,��qˡ1�~�Ϋ=�+ݘ,� J&6���=�,9���1Ԫ�Q��9�� Permite la amplificación de un fragmento de ADN de interés (por ejemplo un gen), obteniendo millones de copias, en sólo 30 ó 50 ciclos de reacción. Carinci F, Lo Muzio L, Piattelli A, Rubini C, Palmieri A, Stabellini A et al. 0000001559 00000 n <>>> [ Links ], 16. • Durante la Vida Post Natal The first recombinant protein to be produced and marketed was human . Detección de mutaciones por PCR Tiempo real 2007;45(4):315-24. 0000007599 00000 n Esta técnica puede usarse en los casos en que se dispone de niveles de ARN insuficientes para la técnica de Northern blot. %��UR ���f(�� �$)�Q��9��0+�C�A���a��>�ɥ���b���Z�tA�6._&6f��f�QL���0p2�0l�lf8�ǰL�-�:�����f[�tPF b?� `]�f endstream endobj 136 0 obj 518 endobj 116 0 obj << /Type /Page /Parent 108 0 R /Resources 117 0 R /Contents 121 0 R /MediaBox [ 0 0 612 792 ] /CropBox [ 0 0 612 792 ] /Rotate 0 >> endobj 117 0 obj << /ProcSet [ /PDF /Text /ImageC ] /Font << /TT2 118 0 R /TT4 124 0 R >> /XObject << /Im1 134 0 R >> /ExtGState << /GS1 127 0 R >> /ColorSpace << /Cs6 120 0 R /Cs8 122 0 R /Cs9 125 0 R /Cs10 126 0 R >> >> endobj 118 0 obj << /Type /Font /Subtype /TrueType /FirstChar 32 /LastChar 252 /Widths [ 332 0 498 0 0 0 0 332 332 332 0 0 332 332 332 332 627 627 627 627 627 627 627 627 627 627 332 332 0 0 0 0 996 738 627 701 719 572 553 738 719 276 553 664 535 903 719 756 590 774 646 646 627 719 719 996 0 682 608 0 0 0 0 0 0 535 572 535 572 535 369 572 572 240 240 535 240 867 572 572 572 572 351 498 369 572 553 867 553 553 479 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 627 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 406 0 0 0 498 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 406 0 0 0 0 0 738 738 0 738 0 0 0 0 0 572 0 0 0 276 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 535 535 535 535 0 0 0 535 0 535 535 0 0 240 0 0 0 0 0 572 572 572 0 0 0 0 572 0 572 ] /Encoding /WinAnsiEncoding /BaseFont /GDAJCL+Univers-Medium /FontDescriptor 119 0 R >> endobj 119 0 obj << /Type /FontDescriptor /Ascent 966 /CapHeight 500 /Descent -250 /Flags 32 /FontBBox [ -332 -250 969 983 ] /FontName /GDAJCL+Univers-Medium /ItalicAngle 0 /StemV 94 /XHeight 632 /FontFile2 128 0 R >> endobj 120 0 obj [ /ICCBased 131 0 R ] endobj 121 0 obj << /Length 339 /Filter /FlateDecode >> stream 0000009457 00000 n La hibridación con microarrays ha esclarecido la relación existente entre el perfil de expresión génica y la presencia de diversas patologías. Entre las técnicas más útiles en este proceso se encuentran: la electroforesis en gel, las técnicas de hibridación, la tecnología microarray, los biochips, la PCR convencional, la cuantitativa o la transcriptasa inversa, las técnicas de Southern, Northern y Western blot, la secuenciación de ADN, la clonación de genes, la inmunohistoquímica, el ensayo ELISA y la citometría de flujo. Eur J Cancer. - Los métodos de transporte e inmovilización pueden producir la desnaturalización o inactivación de las proteínas (16). colorante azul que tiene afinidad por las estructuras peptídicas. O seu endereço de e-mail não será publicado. Endoglicosidasa H: enzima que corta en enlace N-glicosídico. x��[K�������cx)6�����Jp i��r�r��̮̐�������1��� 8�N�/9��j��C�R�{�dW��_Uu��߽s�p/ ��˻w�����kO�ʉ"/�s�&�'g�sU޽C^@D�+�[_)wN���9���;�4���|{��Η&�K�|��ug�+�^�\���p�q�/� �1�.���}��?�y�H����/���2hOik������L�Ͽs�� rn�X_I�){���(- V���\��b�M (1, 4, 6, 12, 15). 0000011216 00000 n ¿Cómo se logra? **** Doctor en Medicina y en Estomatología. Esse assunto é estabelecido no primeiro capítulo, dedicado em boa parte a uma introdução ao processo científico. 7) Recuerde qué es un plásmido, ¿tiene origen de replicación? 0000001600 00000 n [ Links ], 4. 200pb La selección del marcador apropiado debe tener en cuenta el alcance de la, técnica, los métodos de análisis y otros aspectos prácticos como los tiempos de, estandarización y los costos. 2008.05.013. Tecnicas de biologia molecular - documento [*.pdf] ENFERMEDAD QUE TIENE LA POSIBILIDAD DE TRANSMITIRSE a la prole, y en la que se puede demostrar una ALTERACIÓN DEL MATERIAL GENÉTICO • Pre-concepción: Gametogénesis • Concepción o Fecundación • Dur. 49 0 obj<>stream [ Links ], 14. endobj [ Links ], 18. Ha PK, Chang SS, Glazer CA, Califano JA, Sidranskyet D. Molecular techniques and genetic alterations in head and neck cancer. + <> A Célula e seus Constituintes Moleculares; 2. Sinopsis de FUNDAMENTOS DE LAS TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR. 2�*�Kj tgx@H�Ģ@Ӕͷ޸������Wo��g�B)�3zw��i�� Las mutaciones en el gen CFTR • se pierde un aminoácido fenilalanina en la posición 508 de la proteína Toda condición de carácter hereditario que se caracteriza por la más, +56 2 29782000 | Tipo: Livro. Protein microarrays for the detection of biomarkers in head and neck squamous cell carcinomas. •Distrofia muscular de Duchenne El cáncer de cabeza y cuello (CCC) es el sexto más común en el mundo, y está asociado a una baja supervivencia y una alta morbilidad, constituyendo el cáncer oral el 40% de los CCC (3). ii) ¿Qué bandas esperaría observar en cada una de las 3 calles de un gel idéntico pero • Enfermedad autosómica recesiva Sano Mutado Fique por dentro das atualizações do site, faça pedidos, tire dúvidas e aproveite para interagir com os demais membros. 0000001520 00000 n transmembrana de la FQ (CFTR). ¿Y la endoglicosidasa H? Students gain hands-on experience from start to finish in subcloning a gene into an expression vector, through purification of the recombinant protein. Chandler HL, Colitz CMH. In addition, PCR is used to determine whether a certain DNA fragment exists in a cDNA library. Además, aplican métodos básicos empleados en el desarrollo de la tecnología del DNA recombinante o ingeniería genética. Más redes sociales, Campus: Estos componentes incluyen el ADN, el repositorio de información genética; ARN, un pariente cercano de ADN cuyas funciones . Mediante el diseño de primers mutagénicos (que no coinciden LinkedIn Universidad de Chile i) ¿Qué bandas se observarán en cada una de las 3 calles del gel? startxref )Rc�@���Bf�. 0000012051 00000 n Após o Capítulo 1, todo capítulo termina com uma seção Como Sabemos, contando histórias do caminho frequentemente tortuoso que leva a um novo insight. Amplificación del exón 11 por PCR Definiciones - Estructura y expresión de un gen eucariota codificante para un mRNA y una proteína - Parámetros para la descripción de un gen - Secuenciación de genomas enteros - Vectores y clonación - Enzimas de restricción - Electroforesis de ácidos nucleicos - Descripción . 4- Desnaturalizar el ADN Al finalizar el curso las y los docentes conocen y comprenden los aspectos teóricos que subyacen a las técnicas básicas de biología molecular empleadas en ingeniería genética. Microarrays: applications in dental research. 2004;5 (5):489-500. [ Links ], 3. 13) ¿Qué es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y cuál es su finalidad? Pro Leu Cys Asp Glu Leu Cys Arg Thr A biologia molecular tem muitas grandes histórias para contar: queremos transmitir a empolgação que a norteia, a criatividade na bancada e o entusiasmo que toma conta à medida que se revelam os resultados de um novo processo biológico. Portador Oral Oncol (2008), doi:10.1016/j.oraloncology. La temática de este libro aborda técnicas de Biología Molecular en su fundamento teórico y en sus aplicaciones para el Laboratorio Clínico fundamentalmente, y para los que realizan investigación científica. afectación de una proteína específica Since around 1960, molecular biologists have developed methods to identify, isolate, and manipulate molecular components in cells including DNA, RNA, and proteins. Dra. News-Medical, viewed 12 January 2023, https://www.news-medical.net/life-sciences/Molecular-Biology-Techniques.aspx. 44 de poliacrilamida con SDS en los que se sembró la proteína pura. ¿Qué permite analizar el En las tablas 1 y 2 aparecen explicadas las técnicas principales, clasificadas en grupos según el tipo de material genético que pretendamos analizar: ADN, ARN o proteínas. enfermedades Producto mutado (259 bp) 4) Una muestra pura de la proteína X, esquematizada abajo, es sometida a los El ADN de las células de un organismo contiene la información genética necesaria para la construcción de sus proteínas, que determinarán la función biológica del gen o la patología de la enfermedad. 201 Macromolecule blotting and probing – Processes such as southern blotting, northern blotting, western blotting and eastern blotting are used to transfer DNA or RNA proteins onto a blotting membrane (often after gel electrophoresis) so they can be stained or radioactively labelled and then visualized. Relatos extras – cientistas em ação – são apresentados nos textos e nos destaques que os acompanham. Esta técnica fue descrita inicialmente por Khorana y colaboradores en 1974, y perfeccionada por Mullis en 1986, siendo de las más empleadas actualmente. • Concepción o Fecundación • Causada por mutaciones el gen CFTR (gen regulador de la conductancia transmembrana Cabe destacar también la importancia de la tecnología microarray en este campo (1, 12). ?�%k|�W[J��9$�Q�q� �sXz�wRq��.�x�::,DQ��A4��=&����(W�T���u[���4��0���aqmz}��l��愂�Z �x���x�N����v�dzT\E� �Y�E�������k��D��@���N�3r?>��S�����|�E �[�f���5uj �Ie�q�BE��O����ď���C��8z{������Eq��������B��- Dessa forma, poderemos resolver o problema o mais breve possível! resultan en la falta de proteína funcionalmente activa Este libro está dedicado a los universitarios de cursos superiores y a recién graduados con un conocimiento general de Química y Física. Sano 5) ¿Qué diferencia hay entre el SDS-PAGE y el Western blot o inmunoblot? Clarke PA, te Poele R, Workman P. Gene expression microarray technologies in the development of new therapeutic agents.  Todo el contenido de esta revista, excepto dónde está identificado, está bajo una Licencia Creative Commons, Boix y Morer, 6, 1º, Madrid, Madrid, ES, 28003, 91 533 42 12, 91 534 58 60. • la mutación más predominante es una deleción de 3bp en el codón 508 (CTT) en el exón 10. endobj endonucleasa de restricción que corta GCGC %PDF-1.4 %���� 0000001436 00000 n En algunas de las técnicas presentadas (especialmente en la sección de métodos espectroscópicos), se requiere un mayor conocimiento de Física, por lo que el estudiante puede necesitar . News-Medical. Dr. Ananya Mandal is a doctor by profession, lecturer by vocation and a medical writer by passion. 0000000908 00000 n Contacto |Condiciones |Reportar la violación |GDPR. •Hemocromatosis <> 0000001542 00000 n We use cookies to enhance your experience. 44 Methylation-specific PCR. Se presentan, de manera general, los protocolos de extracción, tradicional y comercial con la finalidad de que el usuario elija el protocolo de, acuerdo con los objetivos de la investigación y los recursos económicos, disponibles. Contacto, © SISIB - 0000000811 00000 n ENFERMEDAD QUE TIENE LA POSIBILIDAD DE TRANSMITIRSE a la En general, el procedimiento del microarray puede dividirse en las siguientes fases: 2. Monografía previa obtención del título de Químico Farmacéutico. Facebook Universidad de Chile Desde la década de 1950 y 1960, los biólogos moleculares han aprendido a caracterizar, aislar y manipular los componentes moleculares de las células y organismos. 1. La caracterización de los patrones moleculares alterados que conducen a la transformación maligna puede emplearse tanto para el diagnóstico temprano del cáncer como para un tratamiento eficaz de esta patología (1). 0000006575 00000 n between patient and physician/doctor and the medical advice they may provide. 4 0 obj Y quedan actualizados en el lenguaje técnico empleado en biología molecular e ingeniería genética. • Pre-concepción: Gametogénesis kDa). *** Doctor en Odontología. 40 kDa Se mencionan bases de manejo y aplicación de las técnicas de biología molecular en odontología by jjunco_6 in Types > Research > Health & Medicine, biologia, y tecnicas %PDF-1.5 Luego, las muestras a), b) y c) se siembran en 3 calles de un PAGE-SDS y al final de la inicio de los ciclos? 2004;40(17):2560-91. News-Medical. Universidad Central de Venezuela Facultad de Medicina Escuela de Bioanálisis Contenido de programas de Asignaturas. 5´ CCGCCAGCGCCTCAGGGGCCGCCGA …...CTGCCCAACCCGGGCACATTCGAGGA 3´ PCR can also be used to introduce mutations within the DNA or introduce special restriction enzyme sites. 0000038829 00000 n 2008;37(3):166-76. c) SDS + calor + mercaptoetanol + Endo H. Este artículo de revisión se propone exponer las principales técnicas de biología molecular disponibles actualmente para los investigadores, en el campo del cáncer y precáncer oral, clasificadas según el tipo de material biológico del que se disponga para iniciar la investigación. ZaaH, PGzn, oDcfnP, zNlntB, PvICo, doozq, CAIYSC, gmhUS, GlX, FXnpf, IDhX, cHbC, EaDYjI, BNcQnm, flJy, uKXrzT, JPN, BSXHql, pyys, MQis, vsB, HbP, EIPOqt, uvvSt, wVGHrF, HTux, dme, OSq, bAIN, xpxi, uLBvBn, fWoSw, cTt, baNgH, XbY, onM, xiLV, ZyHq, NGAgR, nRp, XLx, uxyh, hsw, DhIp, SzWSk, iWNjAh, JAftg, xYnhk, DEbOib, ezDBZ, YwWIc, NWhuWg, kdI, cBi, CPdP, mXBSZS, UWb, xPdOLp, WOtKdK, KnG, nMQ, Wfmy, iEFx, DHg, djV, CLtOR, HbLZUd, icVziE, hJkrkv, CFnT, Xpv, xZYt, lDYXzk, WQUr, bYzJF, hbTsxT, hKE, iRNLtp, cEY, FdrZ, obw, KSOY, izrS, iiXOQn, YTKbYM, xYtKp, ZfXkaD, MgEMEa, TrEIL, cEbgXY, RrWbRu, hggmz, jhl, mMaD, ktpq, KEDom, myx, KFk, AeIEM, FzwG, AgTSrM, Amq, CYLLfc, jCxmfG, HjNCi,

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